Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина

Качество подготовки пробы - значимый фактор, влияющий на результаты определения гепарина. Нарушение взятия крови из локтевой вены может сопровождаться активацией тромбо­цитов in vitro, что приведет к неверным результа­там с недооценкой содержания гепарина в крови нездоровых. При активации тромбоцитов освобож­дается фактор 4 тромбоцитов (PF4). PF4 высту­пает как естественный Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина антигепарин, нейтрализу-


ющий как нефракционированный, так и низко­молекулярный фракционированный гепарин (НМГ), хотя необходимо подчеркнуть, что НМГ наименее чувствителен к подавляющему действию PF4.

Для предупреждения этого эффекта и подав­ления активации тромбоцитов при транспорти­ровке крови рекомендуется использовать специ­альные пробирки для крови, к примеру CTAD tubes, в каких Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина содержится цитрат, теофиллин, аденозин, декстроза - «коктейль», который пре­дупреждает активацию тромбоцитов.


Способы для определения резистентности к активированному протеину С,

активности протеина S, антитромбина, антифосфолипидных антител


Резистентность к протеину С

Термин «резистентность к протеину С» вве­ден при описании парадокса практического отсут­ствия удлинения АЧТВ после прибавления акти­вированного протеина С (рис. 112). Устойчивость Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина (резистентность) ф.Vа к ингибирующему воздей­ствию активированным протеином С (РАПС) -один из суровых причин риска патологичес-

Рис. 112. Резистентность к активированному протеи­ну С (АПС) при мутации в гене, контролирующем синтез фактора V, которая приводит к образованию фактора Лейден. Тест основан на определении АЧТВ


ких тромбозов. РАПС - нарушение функциони­рования системы протеина Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина С.

Причины, которые оказывают влияние на РАПС, представ­лены в табл. 26. РАПС может быть как врожден­ной, так и полученной. В случае наследования РАПС гетерозиготы имеют риск развития тромбо­зов приблизительно в 7 раз, а гомозиготы - в 80 раз выше, чем в среднем по популяции. РАПС была обнару­жена Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина посреди 20% нездоровых с первичным тромбозом глубочайших вен ноги и посреди 40% нездоровых тромбо-филией. По различным данным от 20 до 60% нездоровых с тромбозом глубочайших вен ноги имеют РАПС.

Таблица 26

Причины, действующие на резистентность к АПС


Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ


Скрининговые испытания на АПС разработаны на базе измененного теста АЧТВ, кото­рый Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина проводится с и без АПС, либо на базе ПВ со змеиным ядом.

Тест резистентности фактора Va к АПС на базе измененного АЧТВ

Добавление АПС в норме вызывает удлине­ние АЧТВ за счет инактивации причин Va и Villa в плазме. Потому в тесте сравнивается вре­мя выпадения сгустка в тесте АЧТВ с Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина добавлени­ем и без прибавления АПС и рассчитывается от­ношение (рис. 114). Референтные значения теста зависят от применяемых реактивов и устройств. Все же, невзирая на различные способы и при­борную базу, обычно добавление АПС к плазме приводит, по последней мере, к 2-кратному удли­нению АЧТВ (табл. 27).

Недостающее удлинение АЧТВ (патологи­ческий Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина итог, свидетельствующий о РАПС) наблюдается у пациентов с фактором V Лейден, волчаночным антикоагулянтом, при беременно­сти, увеличенном содержании фактора VIII и при-


еме оральных контрацептивов. Этот тест имеет специфика для выявления фактора V Лейден приблизительно 80%, неполная специфика связана с воздействием на итог других причин, в част­ности с Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина угнетением активности фактора VIIIa. На результаты теста влияют прием не­прямых антикоагулянтов и введение гепарина. Тест полезен для выявления пациентов с высочайшим риском тромбоэмболической заболевания.

Тест для диагностики фактора V Лейден

Мутация гена фактора V (фактор Лейден) оценивается как более всераспространенная при­чина РАПС. Эту патологию можно выявить при проведении Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина теста на РАПС с плазмой пациента, разбавленной 1:5 плазмой с недостатком ф.V. Этот тест обладает высочайшей спецификой и чув­ствительностью на выявление фактора V Лейден (табл. 28).

Тест на РАПС проводится также с использова­нием змеиного яда, обозначаемого как протак (Рго-tac), специфично активирующего протеин С. При внесении активатора протеина Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина С в смесь нор-



Примеры резистентности к активированному протеину С


Таблица 27






Таблица 28

Примеры определения резистентности к активированному протеину С способом без разведения и способом разведения испытуемой плазмы плазмой с недостатком ф. V






Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ



мальной и дефицитной по ф.V плазмы время свер­тывания в тесте АЧТВ Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина удлиняется приблизительно в 2 раза. Если имеется РАПС, удлинение АЧТВ вы­ражено в малой степени.

Определение протеина С

Для определения протеина С создано несколько способов: иммунохимический способ, способ с хромогенным субстратом и коагуляцион-ный вариант. Для многофункциональных способов ис­пользуется специфичный активатор протеина С из яда змеи щитомордника, обозначаемый как протак.

Определение Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина протеина С с внедрением хро-могенного субстрата

Рис. 113. Принцип определения протеина Сс использо­ванием хромогенного субстрата, АПС - активированный протеин С

Определение основано на активации протеи­на С активатором протак с следующим опре­делением (кинетическим способом либо способом конечной точки) конфигурации оптической плотнос­ти пробы из-за образования паранитроанилина Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина (рис. 113). Этот способ прост, специфичен, просто автоматизируется. Потому что протеин С - витамин-К-зависимый гликопротеин, то при лечении не­прямыми антикоагулянтами (антагонистами ви­тамина К) возникают PIVKA-формы протеина С, которые не владеют антикоагулянтной актив­ностью, но определяются способами с хромоген-ными субстратами. Потому у нездоровых, прини­мающих непрямые антикоагулянты, могут быть Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина завышенными результаты определения протеина С хромогенными способами.


разцах исследуемой плазмы активизируется про-таком. Для контроля тест проводится с и без протака (рис. 114). Активированный протеин С вызывает протеолиз и соответственно инактива­цию причин Va и VIIIa в плазме (рис. 115). Последнее сопровождается удлинением времени свертывания в тесте АЧТВ, по Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина которому оцени­вается активность протеина С в плазме пациен­та. Если фактор Va нечувствителен к активному протеину С, то АЧТВ не удлиняется в присут­ствии активатора протеина С. Рассчитывают отношение АЧТВ с протаком/АЧТВ без прота­ка, величина которого определяется в конкрет­ной лаборатории, потому что тест находится в зависимости Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина от исполь­зованных устройств и реактивов. Все же этот коэффициент близок к 1 у большинства нездоровых с фактором Лейден и с недостатком про­теина С и значительно выше 1 в случаях без де­фицита активности протеина С и при дисфунк­ции протеина S. Способ просто автоматизируется.

Коагуляционный способ оценивает актив Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина­ность протеина С, фиксирующегося карбоксили-рованной частью на фосфолипидах. PIVKA-фор­мы не работают в этой системе, и тест не дает неверных результатов у пациентов, принима­ющих непрямые антикоагулянты либо имеющих недостаток витамина К.

Исказить результаты теста могут такие фак­торы, как наличие мутации ф.V Лейден, присут­ствие Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина в плазме волчаночного антикоагулянта,



Определение протеина С коагуляционным ме­тодом

Пробы пациентов сопоставляются с дефи­цитной по протеину С плазмой, которую полу­чают способом иммуносорбции. Протеин С в об-


Рис. 114. Принцип скрининга на резистентность к акти­вированному протеину С (РАПС).Активатор протеина С из змеиного яда (протак), добавленный к пробе, в Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина норме значительно удлиняет АЧТВ, Если же имеет место РАПС, то удлинения АЧТВ в присутствии протака не происходит


Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ


Рис. 115.Принцип определения протеина С коагуляционным способом.АПС - активированный протеин С, ФЛ фосфолипиды


терапия гепарином. Для получения достоверных результатов очень принципиально качество применяемой протеин-С-дефицитной плазмы.

У неких Преаналитические факторы, влияющие на результаты определения гепарина пациентов, принимающих не­прямые антикоагулянты, выявляются чрезвычай­но низкие числа содержания протеина С. Эти результаты могут быть связаны не только лишь с ис­тинным недостатком протеина С, да и с развитием резистентности фактора Va к АПС.


pravovoj-rezhim-zemel-morskogo-transporta.html
pravovoj-rezhim-zemel-selskohozyajstvennogo-naznacheniya.html
pravovoj-status-arbitrazhnogo-upravlyayushego.html